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新版フローサイトメトリー自由自在

シリーズ:
細胞工学  > 細胞工学別冊

細胞工学別冊  新版フローサイトメトリー自由自在 マルチカラー解析からクローンソーティングまで

監修:
中内啓光(東京大学医科学研究所)
頁数:
192ページ
定価:
本体4,800円(税別)
発行年月:
2004年12月15日発行
ISBN_10:
4-87962-281-8
ISBN_13:
978-4-87962-281-5

5年ぶりの全面改訂.基本原理,各社最新機器の操作法から,マルチカラー解析,高速ソーティング,実際の実験例までをプロトコール形式でわかりやすく解説.“自由自在”に操るために必読の一冊.

目 次

第1部 基礎編
1-1 フローサイトメトリーの原理 松崎有未・小河原美幸
 1 フローサイトメトリーの概要
 2 フローサイトメトリーの原理
  2-1 水流系
  2-2 光学系
  2-3 電気系
  2-4 分取系
 3 フローサイトメトリー関連ウェブサイト
  3-1 機器メーカー
  3-2 抗体メーカー
  3-3 周辺機器メーカー・ソフトウェア
  3-4 研究機関・組織

1-2 プローブの種類と特徴 渡辺信和
 1 染色の原理
 2 蛍光色素
  2-1 蛍光色素の条件
  2-2 各レーザーに対応した蛍光色素
 3 抗体
  3-1 ポリクローナル抗体とモノクローナル抗体
  3-2 クラスとサブクラス
 4 その他のプローブ
  4-1 Annexin V
  4-2 MHCクラス I -ペプチド四量体(テトラマー)
 5 蛍光色素と抗体の組合わせ

1-3 データ解析ソフトウェアと解析法 守田陽平
 1 FCSファイル
 2 ソフトウェア
  2-1 CellQuest
  2-2 FACSDiVa software
  2-3 Summit
  2-4 AppSan
  2-5 FlowJo


第2部 実践編
2-1 アナライザーの基本操作
 (1) べクトン・ディッキンソン社製フローサイトメーター 生井吉郎
 1 FACSCantoの特長
  1-1 搭載レーザーと性能
  1-2 デジタル波形処理
  1-3 蛍光補正
  1-4 マルチカラーに対応した検出システム
 2 FACSCantoの基本操作
  2-1 セットアップ
  2-2 サンプルの測定
 3 データ解析(Biexponential scaling)
 4 操作上のアドバイス
  4-1 蛍光補正のコントロール
  4-2 データ解析

 (2) ベックマン・コールター社製フローサイトメーター 江川 一
 1 機器チェックおよび精度管理
 2 サンプル測定
  2-1 パラメーターの選択
  2-2 プロット作成
  2-3 感度調整
  2-4 リージョンとゲートの設定
  2-5 コンペンセーション(蛍光漏れ込み補正)
 3 その他のポイント
  3-1 蛍光色素の選択
  3-2 測定データの保管

2-2 ソーティングの基本操作
 (1) FACSVantage SE DiVa Option, FACSAria 冨山宏子・生井吉郎・田中 聡
 1 特長
  1-1 デジタル情報処理回路
  1-2 液滴形成数と流速
  1-3 3種類の液滴マスキングによるソーティングモード
  1-4 BDTM Accudropによるdrop delayの設定
  1-5 FACSAriaのみに設置されている新機能
 2 FACSAriaの基本操作

 (2) EPICS ALTRA 江川 一
 1 ディレイの安定化
  1-1 フローセルのノズルの口径, 周波数と振動の強さ
  1-2 シース液の流速
 2 ソート回路
  2-1 液滴内の細胞位置の検知
  2-2 液滴の荷電
  2-3 ソーティングの注意点

 (3) MoFlo 吉村俊一
 1 光軸調整
 2 信号処理
 3 ソーティング

 (4) JSAN 神田昌彦
 1 JSANの構成と原理
  1-1 光軸調整フリー
  1-2 ソート条件設定の自動化
 2 ソーティングの基本操作
  2-1 蛍光検出調整
  2-2 ソーティング
 3 ソート条件設定とソーティング性能
  3-1 OptiDropおよびOptiDelayの性能
  3-2 ソーティングモード
  3-3 ソーティング速度
  3-4 3レーザー, 8カラーでのソーティング


第3部 応用編
3-1 マルチカラー解析 渡辺信和・柴田隆志
 1 マルチカラー解析が普及してきた背景
 2 マルチカラー化を可能にした最近の進歩
  2-1 マルチレーザー搭載機器の登場
  2-2 新しい蛍光色素の開発
  2-3 ソフトウェアの進歩
 3 実際の解析例
  3-1 よくある質問
  3-2 FACSVantage SEとCellQuestソフトウェアを用いた6カラー解析の一例
  3-3 FACSAriaとFACSDiVaソフトウェアを用いた8カラー解析の一例

3-2 細胞内シグナリングの解析 安達貴弘
 1 細胞内カルシウムの測定
 2 活性化MAPキナーゼの測定

3-3 細胞内サイトカインの検出 渋谷和子
 1 基本的な方法
  1-1 細胞の活性化と固定
  1-2 細胞膜透過および細胞内サイトカインの染色
 2 実験例
  2-1 Th1/Th2細胞のサイトカイン産生の観察
  2-2 GFPでモニタリングされた遺伝子導入がサイトカイン産生に及ぼす影響の解析

3-4 細胞周期解析 小賀厚徳
 1 細胞周期
 2 細胞核DNA量の測定
  2-1 細胞核DNA量測定のための蛍光色素
  2-2 細胞単離法
  2-3 PI単染色の実際
  2-4 解析の実際
  2-5 ダブレット, トリプレット
 3 DNA/BrdUあるいはDNA/Ki-67の同時測定
  3-1 DNA-BrdU二重染色
  3-2 DNA/Ki-67染色
  3-3 ウォッシュレス染色
 4 DNA-RNAの同時測定ほか

3-5 磁気細胞分離法によるpre-depletion 清田 純
 1 pre-depletionの必要性
 2 磁気細胞分離法(MACS)とは
 3 pre-depletionの最適化
 4 マウスCD34-KSL細胞ソーティングのpre-depletion

3-6 造血幹細胞の純化とクローンソーティング 田所優子
 1 マウス骨髄細胞からの造血幹細胞の分離
  1-1 骨髄造血幹細胞の純化法
  1-2 コントロール染色
 2 造血幹細胞のシングルセルソーティング
 3 FCMクローンソーティングの精度管理
  3-1 drop delayの設定
  3-2 ソーティングする位置と細胞数の調整

3-7 SP細胞の分離 松崎有未・幸池浩子
 1 細胞調製および染色
 2 フローサイトメトリー
  2-1 セットアップ
  2-2 解析
 3 実験例

3-8 Flow-FISH法によるテロメア長の測定 三好浩之
 1 プロトコール
 2 実験例

3-9 発現クローニングへの応用 大澤光次郎
 1 SP phenotypeを規定する分子の同定
  1-1 レトロウイルスcDNAライブラリーの作製
  1-2 ウイルスライブラリーの作製
  1-3 ウイルス感染
  1-4 細胞の染色
  1-5 SP phenotypeを示す細胞のスクリーニング
  1-6 cDNAの回収
 2 実験例

3-10 造血器腫瘍の診断とモニタリング 宮崎年恭
 1 多次元フローサイトメトリー解析
 2 正常血液細胞の分化成熟パターン
 3 骨髄の再構築モニタリング
 4 治療後のMRD検出
 5 クリニカルソーティング


第4部 メーカーによるフローサイトメトリーの紹介
4-1 ベクトン・ディッキンソン株式会社 船渡裕美
4-2 ベックマン・コールター株式会社 江川 一
4-3 ダコ・サイトメーション株式会社 吉村俊一
4-4 ベイ バイオサイエンス株式会社 村山康二・山下達雄
4-5 古河電気工業株式会社 徐 傑・大久保典雄

索引