1.cDNAライブラリーの作製
2.ゲノムライブラリーの作製
3.ファージの増殖とDNAの調製
4.ハイブリによるスクリーニング
5.発現スクリーニング
第1章 cDNAライブラリーの作製
1.cDNAライブラリー作製の流れ
2.ポリ(A)セレクション
RNAサンプルのproteinaseK処理
オリゴ(dT)セルロースカラムによるポリ(A)セレクション
コラム:DEPC処理
オリゴテックス(dT)30によるポリ(A)セレクション
3.cDNAの合成
cDNA合成の流れ
どのようなcDNAライブラリーを作製するか
逆転写反応
逆転写反応の実際
逆転写反応の効率チェック
コラム:効率チェックの原理
平滑末端を持つ2本鎖DNAの合成
2本鎖DNAの末端処理
アダプターの付加
アダプターの末端リン酸化
コラム:アダプターの自作法
アダプタープライマーの切断
カラムクロマト法によるサイズ分画化
non-RIでのcDNA濃度のチェック
4.ベクターの選択とライゲーション
ベクターとのライゲーション
λファージのパッケージング
ライブラリーのチェック
ライブラリーのタイター測定
コラム:タイターの算出
PCRを使ったインサートサイズのチェック
第2章 ゲノムライブラリーの作製
1.ベクターの準備
2.ゲノムライブラリー用高分子DNAの抽出
DNAの抽出
DNAの濃縮
3.DNAの限定分解
パイロット実験
限定分解
4.ベクターへの組込み
5.ライブラリーのサイズと増幅
第3章 ファージの増殖とDNAの調製
1.スモールスケールでの増殖とDNA調製
プレートライセート法
ライブラリーの増幅
コラム:ライブラリーの増幅と分注
少量のファージからのDNA調製
2.ラージスケールでの増殖とDNA調製
振盪培養法
大量のファージからのDNA調製
3.invivoエキシジョン
コラム:ヘルパーファージ
第4章 ハイブリによるスクリーニング
1.プラークリフティング
2.通常の条件下でのハイブリダイゼーション
コラム:C0t1/2コラム:X線フィルムとプレート培地との照合
3.二次スクリーニング
4.ハイブリダイゼーションの条件の変更
5.オリゴヌクレオチドプローブを用いたハイブリダイゼーション
オリゴヌクレオチドプローブの調製
コラム:ラジオアイソトープ(RI)の化合物の濃度
ハイブリダイゼーション
6.ディファレンシャルスクリーニング法
プラークリフティング
ハイブリダイゼーション
プローブの作製
第5章 発現スクリーニング
1.発現タンパク質のトランスファー
2.抗体を用いるスクリーニング(イムノスクリーニング)
3.結合DNAを用いるスクリーニング(リガンドスクリーニング)
プローブのラベル
DNAとタンパク質との結合