HOME » バイオサイエンス » 細胞工学別冊 » 超実践バイオ実験イラストレイテッド レッスン1
HOME » バイオサイエンス » 超実践バイオ実験イラストレイテッド レッスン1
HOME » バイオサイエンス » バイオサイエンスその他 » 超実践バイオ実験イラストレイテッド レッスン1
大好評「バイオ実験イラストレイテッド」シリーズ姉妹編.
実験をサクサクこなせるテクニックが満載.
第1章 実験ノートの作り方
1 必須な項目
2 書いておくと良い項目
第2章 実験の基本と試薬の調製
1 実験室での注意事項
1-1 ラボベンチ
1-2 ラボコート
1-3 ラボグローブ
2 実験器具の取り扱いと注意
2-1 メスシリンダー
2-2 パスツールピペット,駒込ピペット
2-3 メスピペット
2-4 マイクロピペッター
2-5 マイクロピペッターのキャリブレーションと練習
2-6 マイクロチューブ
2-7 電子天秤
2-8 遠心機
2-9 オートクレーブ
2-10 乾熱滅菌
2-11 pHメーター
2-12 pH試験紙
2-13 分光光度計
<コラム>OD(optical density)とA(absorbance)
3 試薬の調製
3-1 単位のいろいろ
3-2 希釈計算の仕方
3-3 実験用の水
3-4 滅菌法
第3章 分子生物学実験の基本操作
1 酵素の取り扱い方
2 制限酵素によるDNAの切断
3 フェノール抽出
4 アルコール沈澱
4-1 アルコール沈澱に用いられる塩
4-2 エタノール沈澱(エタ沈)
4-3 イソプロピルアルコール沈澱(イソプロ沈)
4-4 PEG沈澱
5 DNAのアガロースゲル電気泳動
5-1 アガロースゲルの作製と電気泳動
5-2 ゲルからのDNA抽出
<コラム>DNAの電気泳動の実際
第4章 大腸菌の取り扱い
1 大腸菌を扱う際に必要な無菌操作
2 無菌操作の注意事項
2-1 実験器具,実験試薬の滅菌
2-2 実験器具,実験試薬の滅菌状態の維持
2-3 実験操作中における浮遊塵,落下塵の混入の防止
2-4 実験操作中における未滅菌の物への接触の防止
3 シングルコロニーのピックアップから液体培養へ
4 液体培養からプレート線画培養(ストリーキング)へ
5 液体培養からフローズンストックの作製
6 フローズンストックからの培養
第5章 ゲノムDNAの調製
第6章 PCRの基本
1 一般的なPCR法
1-1 PCR用試薬
1-2 サーマルサイクラー(PCRマシーン)
2 プライマー設計
2-1 一般的なプライマー
2-2 ネステッド・プライマー
2-3 ディジェネレート・プライマー
3 ライブラリーからの遺伝子末端の増幅
4 PCR産物の精製
第7章 ベクターとのライゲーション
1 ベクターの調製
1-1 1箇所で切断したベクターの調製
1-2 2箇所で切断したベクターの調製
2 ライゲーション反応の種類とインサートDNA末端の加工
2-1 制限断片のクローニング(標準的なライゲーション)
2-2 プライマー中に制限酵素サイトを入れたPCR産物のクローニング
2-3 pol I 型酵素によるPCR産物のクローニング(TAクローニング)
2-4 α型酵素によるPCR産物のクローニング(TArget クローニング)
2-5 平滑末端を作ってクローニングする場合
第8章 形質転換からコロニーPCRまで
1 コンピテントセルの準備
1-1 市販のコンピテントセル
1-2 簡単なコンピテントセルの作製法
2 コンピテントセルの形質転換
2-1 大腸菌へのDNAの導入
2-2 寒天培地への植え継ぎ
2-3 コロニーの確認
3 インサートチェックのためのコロニーPCRとマスタープレート
3-1 PCR反応マスターミックスの作製と分注
3-2 コロニーピッキングとマスタープレートの作製
3-3 PCR
3-4 アガロース電気泳動とゲル染色
3-5 マスタープレートとの照合
<コラム>ブルーホワイトセレクション
第9章 プラスミドプレップ
1 キットを使わないミニプレップ(アルカリ法)
1-1 プラスミドの調製
1-2 プラスミドの精製
2 キットを使ったミニプレップ
3 ミディプレップやマキシプレップなど
<コラム>エンドトキシン
第10章 プラスミドDNAのシークエンシング
1 シークエンス反応
2 反応産物の精製
3 PRISM310の運転
4 終了したら
<コラム>長いDNAはどうやって読む?
第11章 RNAの抽出
1 通常の細胞や動物組織からのRNA抽出
2 繊維質の組織からのRNA抽出
3 poly(A)RNAの精製
第12章 cDNAの合成と定性的RT-PCR
1 cDNAの合成(逆転写)
2 一般的なRT-PCR
2-1 preparativeなRT-PCR
2-2 analyticalなRT-PCR
2-3 多数の微量サンプルからのRT-PCR
3 5'RACEと3'RACE
<コラム>RT-PCRのコントロール
付録 試薬の組成・調製法とマスターシート
1 いろいろな試薬の組成とその調製法
1-1 一般的な試薬
1-2 大腸菌用培地の培養試薬
2 マスターシート