1.細胞株の情報を得る
2.細胞株を分与してもらう
3.培養への準備をする
4.培地・試薬を作製する
5.細胞を培養する
6.細胞の成長を見る
7.コンタミを防ぐ
8.細胞をクローニングする
9.細胞を保存・譲渡する
第1章 細胞株の情報を得る
1.細胞株のある場所がわかっている場合
2.細胞株のある場所がわからない場合
本で調べる
データベースから調べる
カタログで調べる
第2章 細胞株を分与してもらう
1.他の研究者から直接分与してもらう場合
細胞を見せてもらう
細胞の由来を聞く
コラム:MEL細胞の由来
培地について聞く
細胞の培養法について聞く
コラム:試薬の勘違い
その他のお願い
細胞を分与してもらうときのやりとりの例
2.細胞バンクから分与してもらう場合
第3章 培養への準備をする
1.周辺機器
クリーンベンチ
CO2インキュベーター
CO2ボンベ
倒立型顕微鏡
卓上型遠心機
液体窒素による保存コンテナ
アスピレーター
恒温槽
ホットプレート
その他
2.滅菌法のいろいろ
オートクレーブ滅菌
乾熱滅菌
濾過滅菌(フィルター滅菌)
70%エタノール滅菌
3.培養用ガラス器具の洗浄法
ミリQ水でよくすすぐ
洗剤と硝酸を使った洗浄法
コラム:基本動作と培養操作の姿勢
第4章 培地・試薬を作製する
1.基本培地の作製
オートクレーブ滅菌可能な培地の作製(MEM1の例)
コラム:培地の色変化
オートクレーブ不可能な培地の作製(DMEM1の例)
2.血清の準備
ロットチェック
血清の保存
血清の非働化
コラム:血清の非働化
3.培地への添加物の準備
グルタミン溶液の調製
重炭酸ナトリウム溶液の調製
コラム:重炭酸ナトリウム溶液の量とpH
成長因子などの調製
抗生物質などの調製
4.PBSの調製
Ca2+,Mg2+フリーPBSの調製
Ca2+,Mg2+を含んだPBSの調製
5.トリプシン溶液の調製
6.トリパンブルー溶液の調製
第5章 細胞を培養する
1.液体培地で入手した場合
浮遊系細胞の培養(MEL細胞の例)
コラム:UVランプに注意
トリプシン処理を行わない接着系細胞の培養
(PC12D細胞の例)
トリプシン処理を行う接着系細胞の培養
(マウスL細胞の例)
2.細胞を凍結した状態で入手した場合
コラム:あんまり見つめるな!
第6章 細胞の成長を見る
1.検鏡
初歩の顕微鏡の使い方
実際の顕微鏡像
2.ヘモサイトメーターを用いた細胞数の数え方
第7章 コンタミを防ぐ
1.コンタミの主原因とその防御
原因1:37℃の恒温槽の水
原因2:手の汚れ
コラム:70%エタノールでの除菌
原因3:操作の途中で外から持ち込んだもの
原因4:クリーンベンチの後ろを人が行き来して起こる風
原因5:クリーンベンチ内のものの配置
原因6:培地が付いたディッシュのフタ
コラム:ビールの誘惑
原因7:CO2インキュベーター内の汚染
2.コンタミした場合の処理
コンタミした細胞を始末する前に
コンタミした培地・細胞の処理
第8章 細胞をクローニングする
1.メチルセルロース法
メチルセルロース溶液の調製
メチルセルロースへの細胞の播き込み
コロニーの吊り上げと増殖
2.(ペニシリン)カップ法
コロニー形成率の測定
コロニーの回収
3.96穴プレートを用いた方法
第9章 細胞を保存・譲渡する
1.細胞の保存
2.細胞を他人にあげる場合