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改訂3版モデル植物の実験プロトコール

  • 正誤表
シリーズ:
細胞工学  > 細胞工学別冊
 |   細胞工学  > 植物細胞工学シリーズ

細胞工学別冊  改訂3版モデル植物の実験プロトコール イネ・シロイヌナズナ・ミヤコグサ編

監修:
島本功(奈良先端科学技術大学院大学バイオサイエンス研究科)
岡田清孝(京都大学大学院理学研究科)
田畑哲之(かずさDNA研究所植物遺伝子研究部)
サイズ:
A4変
頁数:
328ページ
定価:
本体4,000円(税別)
発行年月:
2005年04月05日発行
ISBN_10:
4-87962-286-9
ISBN_13:
978-4-87962-286-0

大好評の実験書を大幅ページ増で全面改訂.すぐに役立つプロトコールを満載.

目 次

図解 目で見る形態学
1. 目で見るイネの形態学
2. 目で見るシロイヌナズナの形態学
3. 目で見るミヤコグサの形態学
カラー口絵

第1章 基本的な栽培法
 1-1 イネの栽培法
   1.種子の乾燥と保存
   2.種子の休眠打破
   3.発芽
   4.栽培法
   5.採種
 1-2 シロイヌナズナの栽培法
   1.室内栽培
   2.無菌栽培
   3.病害虫対策
 1-3 ミヤコグサの栽培法および根粒菌接種法
   1.種子の滅菌・吸水処理法
   2.種子播種法
   3.種子収穫法
   4.害虫・病原菌対策
   5.inoculation potシステムによる根粒菌接種法

第2章 遺伝学的手法
 2-1 イネにおける突然変異株の分離と交配法
   1.突然変異体の分離
   2.交配法
 2-2 イネにおける遺伝子のマッピング
   1.突然変異遺伝子のマッピング
   2.量的形質遺伝子座(QTL)のマッピング
 2-3 シロイヌナズナにおける突然変異株の分離と交配法
   1.突然変異株の分離
   2.人為的な交配
 2-4 シロイヌナズナにおける遺伝子のマッピング
   1.遺伝様式の確定
   2.変異型F2個体の作製およびDNA抽出
   3.ラフマッピング
   4.ファインマッピング
   5.変異箇所の発見
 2-5 ミヤコグサにおける突然変異株の分離と交配法
   1.エチルメタンスルホン酸(EMS)による変異原処理
   2.突然変異株の分離
   3.人工交配法
 2-6 ミヤコグサにおける遺伝子のマッピング
   1.SSLPを用いたマッピング
   2.CAPSを用いたマッピング
   3.AFLP-STSによるマーカー作成
   4.BSAを用いた目的形質の迅速マッピング
   5.その他のマッピング手法
Short Topics
1 トルイジンブルー法 シロイヌナズナの表皮の異常を検出する

第3章 遺伝子クローニング
 3-1 DNA・RNAの単離法
  3-1-1 イネのDNA・RNA単離法
   1.DNAの単離法
   2.RNAの単離法
  3-1-2 シロイヌナズナのDNA・RNA単離法
   1.DNAの単離法
   2.RNAの単離法
  3-1-3 ミヤコグサのDNA・RNA単離法
   1.DNAの単離法
   2.RNAの単離法
 3-2 ジーン/エンハンサートラップ法
 3-3 アクティベーションタギング法
   1.アクティベーションタギング用ベクターとアグロバクテリウムの入手先
   2.T1世代でのスクリーニング
   3.ラインを入手する場合の解析
   4.候補遺伝子の探索
 3-4 マップベースクローニング法 
  3-4-1 イネのマップベースクローニング法
   1.解析用集団の大規模化
   2.遺伝子近傍のマーカーの作成
   3.高精度連鎖解析
   4.候補遺伝子の特定
   5.相補性検定
  3-4-2 シロイヌナズナのマップベースクローニング法
   1.突然変異の遺伝形質の詳細なマッピング
   2.変異の原因遺伝子の候補の絞り込み
   3.変異の原因遺伝子であることの証明
  3-4-3 ミヤコグサのマップベースクローニング法
   1.背景
   2.交配パートナーの選択
   3.F2種子の回収と近傍組換えF2個体の選抜
   4.F2バルク・AFLP法および染色体ウォーキング
   5.ダイレクトシークエンス法による変異部位の特定
   6.相補実験とミヤコグサTILLINGサービス
Short Topics
1 レーザーマイクロダイセクション法

第4章 培養系と形質転換法
 4-1 イネの培養系とエレクトロポレーションによる一過的発現解析
 4-2 イネのアグロバクテリウムによる形質転換法
   1.イネ完熟種子からのカルス誘導
   2.アグロバクテリウム菌の準備
   3.アグロバクテリウムの接種と除菌,形質転換体選抜
 4-3 シロイヌナズナの培養系と形質転換法
   1.細胞培養法
   2.簡便な形質転換法
 4-4 減圧浸潤法および花序浸し法によるシロイヌナズナの形質転換
 4-5 ミヤコグサの培養系
   1.毛状根培養
   2.無菌植物のクローン増殖と馴化
   3.不定根培養
 4-6 ミヤコグサのアグロバクテリウムによる形質転換法
   1.アグロバクテリウムによる形質転換個体の作出
   2.毛状根形質転換系
Short Topics
1 イネのターゲティング変異体の作製

第5章 遺伝子の機能解析
 5-1 レポーター遺伝子による解析法
  5-1-1 ルシフェラーゼ
   1.生物発光の連続測定実験の概略
   2.生物発光測定実験の注意点
  5-1-2  GFPをはじめとする蛍光タンパク質
   1.蛍光タンパク質の選択
   2.蛍光タンパク質との融合
   3.植物細胞への導入
   4.PEGを用いたシロイヌナズナ培養細胞への一過的遺伝子導入
  5-1-3 GUS
 5-2 in situハイブリダイゼーション法
  5-2-1 イネにおけるin situハイブリダイゼーション法
   1.固定・包埋・切片の作製
   2.RNAプローブの作製
   3.ハイブリダイゼーション
   4.洗浄
   5.発色反応
   6.組織の封入と観察
  5-2-2 シロイヌナズナの胚と茎頂におけるin situハイブリダイゼーション法
   1.固定および包埋
   2.RNAプローブの作製
   3.切片の作製
   4.ハイブリダイゼーション
  5-2-3 シロイヌナズナの根におけるin situハイブリダイゼーション法
   1.固定・包埋・切片の作製
   2.RNAプローブの作製
   3.ハイブリダイゼーション
 5-3 免疫電子顕微鏡法
 5-4 GFP融合によるタンパク質の組織局在の観察
 5-5 共焦点顕微鏡による観察法
   1.タバコ培養細胞におけるGFPマーカーの一過的発現系での観察
   2.形質転換シロイヌナズナにおける蛍光色素FM4-64を用いた観察
 5-6 動物のステロイドホルモンを用いた発現誘導系の利用
 5-7 in vitroトランスレーションシステム
   1.コムギ種子からの胚芽の単離および胚芽抽出液の調製
   2.転写鋳型の調製
   3.mRNA合成および精製
   4.タンパク質合成反応
   5.アフィニティーレジンを使ったタンパク質精製法
 5-8 大腸菌による組換えタンパク質の産生
   1.組換えタンパク質の発現誘導
   2.アフィニティークロマトグラフィーによる精製
 5-9 プルダウンアッセイ法
   1.融合タンパク質をレジンに結合後,相互作用を解析する方法
   2.融合タンパク質とタンパク質Yを先に相互作用させる方法
 5-10 RNAi法
   1.RNAiトリガーベクターの作成
   2.pANDAを利用したRNAi実験例
 5-11 マイクロアレイ法
   1.cDNAマイクロアレイの作成
   2.RNAの調製
   3.プローブDNAの調製
   4.ハイブリダイゼーションおよび洗浄
   5.スキャニングおよびデータ解析
Short Topics
1 FISH法
2 FRETによるリアルタイムイメージング
3 FOXハンティングシステム

第6章 ゲノム解析のリソース
 6-1 イネのゲノムリソース
   1.農業生物資源研究所で公開・提供している研究材料と研究支援
   2.クローンおよび系統の入手方法
 6-2 シロイヌナズナのゲノムリソース
   1.シロイヌナズナのゲノムリソースとリソースセンター
   2.リソースに関わる権利と規則
   3.今後期待されるシロイヌナズナリソース
 6-3 ミヤコグサのゲノムリソース
   1.ゲノム構造情報と遺伝地図情報
   2.遺伝子発現解析のためのリソース
   3.ナショナルバイオリソースプロジェクト
   4.海外のリソースの紹介
 6-4 Gatewayベクター
   1.エントリークローン
   2.デスティネーションベクター
Short Topics
1 メタボローム解析
2 プロテオーム解析

第7章 役立つウェブサイトの紹介
 7-1 ゲノム情報解析ツール
   1.配列アラインメント
   2.配列解析
   3.検索・リンク
 7-2 データベース
  7-2-1 イネのデータベース
   1.配列情報に関するデータベース
   2.イネの遺伝資源や系統,実験材料に関する情報
  7-2-2 シロイヌナズナのデータベース
   1.シロイヌナズナ・データベースの現状
   2.主要なウェブサイト
  7-2-3 ミヤコグサ・根粒菌のデータベース
   1.ミヤコグサの個体・系統データベース
   2.ゲノム・EST情報データベース
   3.根粒菌・個体データベース
   4.インターネットコミュニティ
  7-2-4 その他の植物のデータベース
   1.配列決定の進んでいる植物ゲノムデータベース
   2.ゲノム情報一般を扱ったデータベース